96孔酶標(biāo)板是一種配合在酶標(biāo)儀上,用來(lái)做酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)的器材,是酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中的重要載體工具。在使用時(shí)需要按照既定的步驟進(jìn)行,一般情況,使用方法如下:
1、加樣品:將標(biāo)本稀釋液加到包被板內(nèi),將需要檢測(cè)的血清用PBS或生理鹽水按照1:20的比例稀釋后取10ul加入到96孔酶標(biāo)板的反應(yīng)孔內(nèi)。
96孔酶標(biāo)板
2、加對(duì)照:加入陰性對(duì)照3孔,陽(yáng)性對(duì)照1孔,還有100ul的對(duì)照血清。
3、進(jìn)行溫育:將反應(yīng)板震蕩,使樣品充分的混勻,置于37℃的溫箱或者水浴反應(yīng)20分鐘的時(shí)間。
4、洗板:用蒸餾水將洗滌液15ml稀釋至300ml的體積。手洗的時(shí)候應(yīng)該將反應(yīng)板孔內(nèi)的容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔的位置,然后放置30秒鐘后用力甩去,這樣的動(dòng)作重復(fù)5次后開始拍干。機(jī)洗需要進(jìn)行5次,每孔注入洗滌液200ul或者可以注滿,然后停留30秒鐘后吸盡拍干。
5、加酶標(biāo)工作液:在每孔內(nèi)加入100ul的酶標(biāo)工作液,放置到37℃的溫箱中,反應(yīng)20分鐘后洗板5次,洗板的操作和上述步驟4是相同的。
6、這是反應(yīng)的最后一步,就是顯色和終止反應(yīng):將底物50ul加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃條件下避光顯色10分鐘的時(shí)間。在每孔內(nèi)加入終止液50ul混勻用以終止反應(yīng)。
96孔酶標(biāo)版的使用需要在無(wú)菌的條件下進(jìn)行,因此在使用前需要進(jìn)行消毒,但需要注意的是有的酶標(biāo)板在消毒之前需要認(rèn)真的閱讀說(shuō)明書,看是否可以進(jìn)行高溫消毒。