三角細胞培養(yǎng)搖瓶是細胞培養(yǎng)中的常用耗材,也可用于培養(yǎng)基的配制、混合及儲存。利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基可以按照以下步驟操作:
三角培養(yǎng)搖瓶
1、配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3、調(diào)PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4、過濾
濾紙或棉花進行過濾。(有時可以省去)
5、分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角培養(yǎng)瓶
若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角培養(yǎng)瓶,最多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度;
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。
6、包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7、滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
8、擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。
9、貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。
培養(yǎng)基是細胞生長的必需營養(yǎng)物質(zhì),利用三角培養(yǎng)瓶制備培養(yǎng)基可按照以上步驟操作,在使用前需確保培養(yǎng)基的無菌性,以免影響細胞正常繁殖。