細胞培養(yǎng)瓶是細胞培養(yǎng)中的一種耗材類產品，包括多種類型，其中懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶是一種主要應用于懸浮細胞培養(yǎng)的耗材，尤其在昆蟲細胞培養(yǎng)中應用比較多。
懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶
昆蟲細胞是來自的一類，通過培養(yǎng)制造的病毒可作殺蟲劑，基因片段可用來構建重組病毒以高效表達，生產某些藥用蛋白。因此昆蟲細胞的體外培養(yǎng)正逐漸成為生產用于和人類健康保健用的生物產品的重要手段。
利用懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶培養(yǎng)昆蟲細胞可按以下步驟操作：
1. 將4 ml 含10%胎牛血清的完全昆蟲細胞培養(yǎng)基加入一個25 cm2 懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶。取出一支凍存Sf9細胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后劇烈搖動融化之，當安瓿的內容物幾乎完全融化時，將安瓿浸入70%乙醇，消毒外壁。
2. 打碎安瓿頸部，將內容物轉移至25 cm2 培養(yǎng)瓶，用手輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使細胞分散均勻，于27℃溫育2~3 h 直到細胞貼壁。
3. 除去舊培養(yǎng)液，換5 ml 含10%胎牛血清的新鮮完全培養(yǎng)液。繼續(xù)溫育，每3天換液一次，直到細胞生長匯片。
4. 準備一個新的25 cm2 培養(yǎng)瓶，加入4 ml 含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液
5. 當Sf9細胞已生長匯片時，棄去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。加入新鮮的完全培養(yǎng)液，用移液管輕柔吹打或用手掌輕拍培養(yǎng)瓶，重懸細胞。
6. 用為培養(yǎng)組織細胞所設計的血細胞計數器計數細胞，在25 cm2 培養(yǎng)瓶中接種1×106~2×106個細胞，搖動培養(yǎng)瓶使細胞均勻分布。于27℃溫育，每3天用含10%FBS的完全培養(yǎng)基換液，直到培養(yǎng)瓶中的細胞生長匯片。
7. 棄去匯片的單層培養(yǎng)細胞中的培養(yǎng)液，并重懸細胞。
8. 用血細胞計數器計數細胞。以約4×105~5×105細胞/ml 的密度將細胞接種于一個旋轉培養(yǎng)瓶中。于27℃溫育，以60~80 r/min 的速度恒速攪拌。輕微開啟旁邊的通氣孔，以保證充足的空氣。
9. 每隔2~3天進行細胞計數，當細胞密度達到2×106~2×106細胞/ml 時進行傳代， 將適量細胞移至一個含有新鮮完全培養(yǎng)液的新培養(yǎng)瓶中，使終密度達到4×105~5×105細胞/ml。或者，倒出適當體枳的細胞懸液，代之以新鮮培養(yǎng)液。
10. 加入0.1 ml 的0.4%臺盼藍于1 ml 對數生長的細胞中，確定細胞活力。在低倍顯微鏡下檢査細胞，計數被臺盼藍染色的細胞（死細胞），并計算總細胞數。
11. 將細胞傳代至1份完全培養(yǎng)液/10%胎牛血請清和1份無血清培養(yǎng)液混合的液體中。讓細胞長至匯片（單層培養(yǎng)），或達到2×106~3×106細胞/ml 的密度（懸浮培養(yǎng)）。
12. 將細胞傳代至含胎牛血清完全培養(yǎng)液與無血清培養(yǎng)液比例為1：4的混合液中，讓細胞生長。
13. 用完全培養(yǎng)液與無血清培養(yǎng)液比例為1：8至1：10的混合液，重復細胞傳代與細胞生長的步驟。
14. 用無血清培養(yǎng)液傳代細胞。
5層細胞工廠
15. 計數呈指數生長的待凍存細胞，于室溫以1 000g 離心10 min，棄去上清液。
16. 用含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液以1×107~2×107細胞/ml 的密度重懸細胞團塊。 加入等體積含10%胎牛血清和20%DMSO的完全培養(yǎng)液，將細胞置于冰浴。吸出 1 ml 細胞移入帶螺口蓋的凍存管中，于-20℃保存2 h，然后于-70℃過夜。
17. 將凍結的細胞移至液氮罐中以便長期保存。
以上是懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶在昆蟲細胞培養(yǎng)中的應用，隨著生物制藥技術的不斷發(fā)展，細胞培養(yǎng)瓶等耗材類產品的的市場需求量也將隨之增加。
