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細胞培養(yǎng)瓶在細胞傳代中的應用
發(fā)表日期:2021-06-03

細胞培養(yǎng)瓶根據形狀的不同有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形等種類,規(guī)格包括25ml、75ml、175ml、250ml,其中小規(guī)格的多用于細胞傳代、保存細胞、為實驗提供細胞等用途。

細胞培養(yǎng)瓶

T225細胞培養(yǎng)瓶

細胞在細胞培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。具體操作步驟如下:

10層細胞工廠

10層細胞工廠

  1. 將長滿細胞的細胞培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
  2. 加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。
  3. 瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發(fā)白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
  4. 用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。


懸浮細胞培養(yǎng)搖瓶

以上是細胞培養(yǎng)瓶在細胞傳代中的應用,消化液的配制方法如下:稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA,使最終濃度達0.02%。

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